Certificación sanitaria del
germoplasma de Mandioca
(Manihot esculenta Crantz)
Maritza Cuervo Ibañez
Coordinadora del Laboratorio Sanidad de 
Germoplasma – PRG
Diana Patricia Niño Jimenez
Asociado de investigación Laboratorio de Sanidad 
de Germoplasma - PRG
14, Diciembre, 2021
1. Banco de Germoplasma de la Alianza Bioversity and CIAT
El Programa de Recursos Genéticos del CIAT 
Diversidad de materiales genéticos: contenidos en las 
conserva y distribuye tres colecciones de variedades tradicionales, los cultivares modernos, y 
importancia económica a nivel nacional e sus parientes silvestres.
internacional
Frijol Forrajes tropicales Yuca
37.938 22.694 6.155
1. Banco de Germoplasma de la Alianza Bioversity and CIAT
Colección bonsai de yuca
Duplicado de seguridad
Plantas establecidas:
5550 accesiones en 
Condiciones de invernadero
Fuente: Laboratorio de 
Conservación in vitro
Fuente: Foto LSG
1. Banco de Germoplasma de la Alianza Bioversity and CIAT
Entre las actividades fundamentales que tiene el banco de germoplasma de la Alianza
Bioversity Internacional y el CIAT se encuentra la distribución, que consiste en el envío de
germoplasma a diferentes usuarios nacionales e internacional.
Distribución Requerimientos fitosanitarios
Cumplimiento de tres parámetros: Cumplir con pruebas de indexación
para los patógenos cuarentenarios.
Calidad Calidad 
fisiológica fitosanitaria
Reportados Exigidos por el
a nivel local país receptor
Calidad 
genética Certificaciones sanitarias
2. Funciones del Laboratorio Sanidad de Germoplasma
➢ Evaluación y monitoreo de patógenos en
campos de regeneración.
➢ Verificar el estado fitosanitario del
germoplasma distribuido por el PRG y otros
programas del CIAT (frijol, Forrajes y yuca),
nacional e internacionalmente.
➢ Presenta las certificaciones requeridas por
el Instituto Colombiana Agropecuario (ICA).
➢ Llevar a cabo investigación para estandarizar
e implementar nuevas metodologías de
diagnóstico que sean mas eficientes y
sensibles.
3. Certificación de la colección in vitro de yuca
6.155 accesiones Enfermedades cuarentenarias, de
acuerdo a la lista de patógenos
Condiciones in vitro cuarentenarios designados por el ICA.
Enfermedad de cuero de sapo (ECS)
Cassava frogskin associate virus (CsFSaV) Mosaico común de la yuca Virus X de la yuca
Cassava new alphaflexivirus (CsNAV)
Cassava polero-like virus (CsPLV) Cassava common mosaic virus (CsCMV) Cassava x virus (CsXV)
Cassava torrado-like virus (CsTLV)
Fitoplasma 16SrIII-L
Reportes de patógenos cuarentenarios para la colección in 
vitro de yuca en Colombia. 
Reporte
Reporte del Fitoplasma 
Primer reporte Reporte del virus CsFSaV, 16SrIII-L, 
de la ECS virus CsXV, Calvert et al., Alvarez et al., 
Pineda et al., Harrison et al., 2008; Cuervo, 2009. Alvarez 
1983. 1986. CsCMV 2006. et al., 2010
1971 1980 1986 1991 2006 2009 2010
Cuero Desarrollo de la CsXV Reporte del CsFSaV Evaluación de 
de sapo prueba de virus CsCMV, la colección de 
injerto para Nolt et al., yuca por 
diagnóstico 1991. injertos y RT-
PCR para 
CsFSaV 
99.96%
Reportes de patógenos cuarentenarios para la colección in 
vitro de yuca en Colombia. 
LAMP-Rotor Disponibilidad
Diagnóstico con Evaluación de Gene Q para de la colección
qPCR (CsFSaV y la colección de Fitoplasma de yuca 
Fitoplasma yuca para virus 16SrIII-L, evaluada para 
16SrIII-L) Pardo, ECS usando Cuervo et al., todos los 
2013 PCR RT-PCR PCR 2017 qPCR patógenos
2013 2014 2015 2017 2017 2019 2021
qPCR Reporte de virus Primers para LAMP Diagnóstico de 90%
CsNAV, CsPLV, CsCMV y CsXV CsPLV – CsTLV 
CsTLV. Carvajal (PCR), Lozano por qPCR
et al., 2014 et al., 2017.
4. La Enfermedad del Cuero de Sapo (ECS)
Generalidades: *Calvert et al., 2012 Síntomas:
✓ La CFSD es una enfermedad de ✓ Formación de fisuras pequeñas
importancia económica que afecta a las longitudianales a lo largo de la raíz.
raices de la yuca. ✓ Reducción del diámetro de la raíz.
✓ Reportada por primera vez en 1971 en ✓ Algunas variedades como secundina
el Cauca, Colombia. (COL 2063) generan síntomas en las
✓ La CFSD afecta la producción de yuca hojas como mosaico, clorosis y
causando pérdidas del 90% o mas. curvatura en los bordes de las hojas.
Raíces con síntomas de ECS y hojas de COL 2063 con síntomas de ECS
5. El virus CsCMV y CsVX de la yuca
Virus del mosaico común de la yuca (CsCMV) Virus X de la yuca (CsXV) 
Género: Potexvirus ✓ Género: Potexvirus✓
✓ Enfermedad Mosaico ✓ Enfermedad 
común de la yuca. asintomática x de la 
✓ Síntomas: Clorosis y yuca
mosaico delimitados ✓ Síntomas: Clorosis en 
por las nervaduras. plantas indicadoras. 
Reportes: Brasil, Asintomático en yuca✓
Paraguay, Colombia, ✓ Reporte: Costa norte 
Argentina, Perú y de Colombia y 
México. Venezuela.
Lozano et al., 2017
✓ pérdidas del 30 al 60% 
Harrison et al., (1986);
Di Feo et al., 2015; Fernandez et Chaparro-Martínez & Trujillo-
Cuervo et al., 2017 al., 2017; Nolt et al., 1991; Costa, Pinto, (2001) 
1940; Zettler & Elliott, 1985
6. Estandarización de metodologías
ELISA PCR RT-PCR qPCR LAMP
• Mosaico • Mosaico • Cassava • Cassava 
Común común frogskin frogskin
associated associated 
virus (CsFSaV) virus (CsFSaV)
• Cassava new 
alphaflexivirus • Fitoplasma • Fitoplasma
16SrIII-L 16SrIII-L
(CsNAV)
• Virus X
• Virus X • Cassava
polero-like • Cassava 
polero-like 
virus (CsPLV)
virus (CsPLV)
• Cassava
Torrado-like
virus (CsTLV)
7. Confirmación de resultados
• Corte, purificación y analisis de secuencias.
1    2     3    M
QIAquick Gel 
Extraction Kit
Qiagen
8. Técnicas de diagnóstico para Virus
1.Extracción ácidos nucleicos ARN
2. Lectrua de 
1.3 Tratamiento
ácidos nucleicos:
DNAsa (Promega)
ARN
1.1 Recepción de 1.2 Extracción ácidos
material vegetal nucleicos
Plantas in vitro Protocolo: 
3. Síntesis de cDNA
con follaje CTAB modificado
(Lopez et al., 2006)
8. Técnicas de diagnóstico para Virus
3. Síntesis de cDNA 5. Diagnóstico por PCR 5. Diagnóstico por qPCR 
convencional (real time)
CsNAV
CsTLV CsFSaV 
CsCMV CsPLV
CsXV
4. Verficiación de cDNA
PCR control 
interno
*cDNA con 
correcta síntesis
9. Técnicas de diagnóstico para Fitoplasma 16SrIII-L
Extracción ácidos nucleicos ADN
3. Lectura de ácidos
nucleicos:
ADN
4. Evaluación de fitoplasma 
16SrIII-l con LAMP – Rotor 
1. Recepción de 2. Extracción ácidos Gene Q
material vegetal nucleicos ADN
Plantas in vitro Protocolo: 
con follaje, tallo CTAB modificado 5. Análisis de 
y raíz (Lopez et al., 2006) resultados
*Alvarez et al., 2009; Alvarez et al. et al., 2014; Keremane 2015
10. Evaluaciones historicas yuca: PRG
Muestras de yuca Evaluadas por año Muestras de yuca positivas por año
4913 1152 1178
5000 1200
4459
4500
1000
4000
3460
3500
800
2824 Virus Virus
3000 2564
2417 Phytoplasma Phytoplasma
2500 2118 600
Bacterias Bacterias
2000
1391 Total 400 Total
1500 3051046 245 264
896
1000 727
203 181 203
583 143
454 399 453 200 102 119
500 26
0 0 8 0 10 0 0 24 0 19 0 22 0
0 0
2017 2018 2019 2020 2021 2017 2018 2019 2020 2021
Fuente: Datos de evaluación LSG
11. Evaluaciones de yuca: Otros Programas
Muestras por año: Otros Programas Muestras positivas por año: Otros 
Programas
1400 1268
300
1200 259 260
250
1000
826
200
800
600 150
128 131
442
400 317 100
191
126
200 50
0 0 3 0 1 0
0 0
2020 2021 2020 2021
Virus Phytoplasma Bacterias Total Virus Phytoplasma Bacterias Total
Fuente: Datos de evaluación LSG
12. Progreso de la evaluación sanitaria de yuca
El uso de las diferentes metodologías de
diagnóstico, han permitido la evaluación
de la colección para los patógenos de
interés cuarentenario (Virus y fitoplasma
16SrIII-L).
Alcanzando hasta la fecha:
90% de disponibilidad
Colección in vitro de yuca 
Accesiones: 6.155 Fuente: Datos Laboratorio Conservación in vitro
13. Evaluación sanitaria de colección Bonsai yuca
Evaluación general de virus y fitoplasma 16SrIII-L 
25.00 21.54
20.00
16.26
15.00
10.00 7.726.50
5.28
5.00 2.03
0.81
0.00
CsFSaV CsNAV CsPLV CsTLV CsCMV CsXV Fitoplasma
Accesiones colectadas y evaluadas: 496
Colecta de material vegetal para evaluación sanitaria de accesiones de yuca
% de positivas
Future seeds
Referencias bibliográficas
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Género Potexvirus: caracterización biológica, diagnóstico molecular y obtención de genoma completo). Colombia:
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• Keremane, M., Ramadugu, C., Rodriguez, E., Kubota, R., Shibata, S., Hall, D. G., Roose, M. L., Jenkins, D. and Lee R. F.,
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psyllid vector, Diaphorina citri Kuwayama and its implications in disease management. Crop Protection, 68: 41-48.