1 2 PRODUCCIÓN DE TUBÉRCULOS-SEMILLA DE PAPA CALIDAD PREBÁSICA Y BÁSICA Procedimiento Operativo Estándar (POE) Wilmer Pérez y Jorge Andrade-Piedra Febrero 2024 3 Producción de tubérculos-semilla de papa calidad prebásica y básica. Procedimiento Operativo Estándar (POE). © Centro Internacional de la Papa 2024 DOI: 10.4160/cip.2024.02.002 Las publicaciones del CIP contribuyen con información importante sobre el desarrollo para el dominio público. Los lectores están autorizados a citar o reproducir este material en sus propias publicaciones. Se solicita respetar los derechos de autor del CIP y enviar una copia de la publicación donde se realizó la cita o publicó el material al Departamento de Comunicaciones, a la dirección que se indica abajo. Centro Internacional de la Papa Apartado 1558, Lima 12, Perú cip@cgiar.org • www.cipotato.org Citación: Pérez, W.; Andrade-Piedra, J. 2024. Producción de tubérculos-semilla de papa calidad prebásica y básica. Procedimiento Operativo Estándar (POE). Centro Internacional de la papa. Lima, Perú. 22 p. DOI: 10.4160/cip.2024.02.002 Diseño y diagramación: Departamento de Comunicaciones Febrero 2024 El CIP agradece a los donantes y organizaciones que apoyan globalmente su trabajo a través de sus contribuciones al Fondo Fiduciario del CGIAR: www.cgiar.org/funders © 2024. Esta publicación está registrada por el Centro Internacional de la Papa (CIP). Está licenciada para su uso bajo la Licencia Internacional de Atribución 4.0 de Creative Commons http://www.cipotato.org/ http://www.cgiar.org/funders 4 Contenido Agradecimientos .................................................................................................................................................... 6 1 Introducción ...................................................................................................................................................... 7 2 Propósito ........................................................................................................................................................... 7 3 Alcance .............................................................................................................................................................. 7 4 Normas para tener en consideración ............................................................................................................... 7 5 Responsabilidades ............................................................................................................................................ 7 6 Procedimiento .................................................................................................................................................. 8 6.1 Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica ............................................................................ 8 6.2 Producción de tubérculos-semilla de calidad básica ................................................................................ 12 6.3 Producción de tubérculos-semilla de materiales de mejoramiento y de conservación de germoplasma... 15 6.4 Manejo integrado de plagas y enfermedades .......................................................................................... 15 6.5 Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica o básica bajo contrato ...................................... 16 7 Movimiento de semilla y otras regulaciones ................................................................................................. 16 7.1 Seguridad ................................................................................................................................................. 17 7.2 Registros ................................................................................................................................................... 17 8 Referencias ............................................................................................................................................... 18 9 Anexos ...................................................................................................................................................... 20 5 Acrónimos APLV Virus latente de la papa andina APMMV Virus del mosaico suave de la papa andina APMoV Virus del moteado de la papa andina AMV Virus del mosaico de la alfalfa CGIAR Grupo Consultivo sobre Investigación Agrícola Internacional CIC Control Interno de Calidad CIP Centro internacional de la Papa ELISA Ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas NASH Hibridación de ácidos nucleicos NFT Técnica de la Película Nutriente PCR Reacción en Cadena de la Polimerasa PBRSV Virus del anillo necrótico de la papa pH Acidez o alcalinidad del agua PLRV Virus del enrollamiento de la papa PSTVd Viroide del tubérculo ahusado de la papa PVA Virus A de la papa PVS Virus S de la papa PVT Virus T de la papa PVV Virus V de la papa PVX Virus X de la papa PVY Virus Y de la papa PYV Virus del amarillamiento de la papa PYVV Virus del amarillamiento de venas de la papa TMV Virus del mosaico del tabaco 6 Agradecimientos Agradecemos a la Iniciativa Seed Equal del CGIAR por el apoyo financiero a las actividades de producción de semillas de calidad fitosanitaria y a los financiadores que apoyan la investigación en semillas a través de sus contribuciones al Fondo Fiduciario del CGIAR: https://www.cgiar.org/funders/ Reconocer el apoyo financiero de la Minera Poderosa y Asociación Pataz para promover y difundir variedades de papa liberadas por el CIP. https://www.cgiar.org/funders/ 7 1 Introducción La semilla de alta calidad, tanto fitosanitaria como fisiológica, constituye el principal elemento para el desarrollo de cultivos exitosos y la consecución de una productividad óptima. En los países de bajos ingresos, una parte significativa de la brecha de rendimiento actual se atribuye a la calidad deficiente de las semillas. Por lo tanto, el desarrollo del sector de semillas se posiciona como una preocupación central para gobiernos, investigadores, agencias de desarrollo y organizaciones de productores de semillas. Para el Centro Internacional de la Papa (CIP), la producción de tubérculos semilla emerge como un factor crucial para facilitar la diseminación de nuevas variedades y obtener datos pertinentes vinculadas con la adaptación, rendimiento, resistencia a factores bióticos y abióticos, así como características destinadas al procesamiento y almacenamiento de las futuras variedades de papa desarrolladas por sus investigadores. Este documento presenta las especificaciones que deben tenerse en cuenta para la producción de semilla de papa en el CIP en Perú, las cuales están alineadas con las reglamentaciones oficiales de Perú y las políticas institucionales. 2 Propósito Normar la producción en el Centro Internacional de la Papa (CIP) en Perú de tubérculos-semilla de papa: 1. De calidad prebásica. 2. De calidad básica. 3. De materiales de mejoramiento genético y de conservación de germoplasma (variedades nativas de papa y especies silvestres del género Solanum). 3 Alcance Este procedimiento debe ser cumplido por el personal que produzca tubérculos-semilla en campo, invernadero o casa malla a partir de plántulas in vitro libres de patógenos, semilla prebásica, tubérculos o semilla botánica, de variedades mejoradas, variedades nativas, clones de mejoramiento, o especies silvestres del género Solanum. Este procedimiento se aplica a Perú y podrá ser validado para otros países en donde CIP tiene actividades. 4 Normas para tener en consideración a. Políticas operacionales 2.1.2 (Procedimientos de conservación de recursos genéticos, adquisición y distribución de germoplasma) y 2.1.7 (Uso de plaguicidas) 5 Responsabilidades El investigador principal a cargo del estudio será responsable de la producción y manejo del cultivo de acuerdo con los lineamientos del CIP (ver políticas operacionales 2.1.2 y 2.1.7). El científico delegará las actividades a los asistentes de investigación según las actividades a realizar, junto con el supervisor de la estación experimental. El oficial de cuarentena será responsable de la inspección periódica de los invernaderos, campos de propagación y bodegas, en coordinación con el superintendente de la estación experimental y el científico encargado del proyecto. 8 El oficial de cuarentena debe llevar a cada inspección los formatos de inspección, bisturí, pala de mano, cuchillo, bolsas de plástico y papel para la toma de muestras, cámara fotográfica, caja térmica, lapiceros y marcadores. Únicamente el personal capacitado en aplicación de plaguicidas estará a cargo de esta actividad (ver política operacional No. 2.1.7). 6 Procedimiento Se describen 5 procedimientos: 1) Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica 2) Producción de tubérculos-semilla de calidad básica 3) Producción de tubérculos-semilla de materiales de mejoramiento y de conservación de germoplasma 4) Manejo integrado de plagas y enfermedades 5) Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica o básica bajo contrato 6) Movimiento de semilla y otras regulaciones 6.1 Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica a. La producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica se hará en invernaderos o casas malla. El investigador principal del proyecto debe solicitar previamente el invernadero o casa malla, en coordinación con el supervisor de la estación experimental, según el cronograma dispuesto por la estación experimental, y los materiales e insumos necesarios para producir tubérculos-semilla. Los pedidos deben registrarse en el sistema web del CIP. b. La producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica se hará a partir de plántulas in vitro. El pedido de plántulas in vitro se debe realizar a CIP-Germoplasma. c. El invernadero o casa malla debe estar y mantenerse limpio, sin malezas dentro ni a 3 m de sus alrededores. Debe tener una entrada de doble malla y pediluvios con hipoclorito de sodio (agregar 9 partes de agua a una parte de solución comercial al 5%), estar cercado con acceso solo a personal autorizado y no deberá ser usado para almacenar material ajeno a la producción de semilla, ni para almacenar plaguicidas. La malla debe estar en buen estado y no presentar rajaduras o huecos. d. Los trabajadores deben usar ropa de protección adecuada de acuerdo con las actividades que realizan en los invernaderos o casas malla. Los mandiles o guardapolvos deben ser de uso exclusivo para cada invernadero o casa malla. Los trabajadores deberán tener acceso a lavaderos de manos ubicados en las antecámaras de los invernaderos o casas malla, así como a desinfestantes adecuados e. Los trabajadores deben recibir capacitación sobre primeros auxilios, manejo del botiquín, normas de higiene, procedimientos para accidentes y emergencias (incluido manejo de extintores), y entrenamiento especial para los que operan equipos de aplicación de plaguicidas u otros implementos usados en invernaderos. f. Todos los invernaderos deben tener la información del material vegetal que se cultiva, objetivo del ensayo, nombre del proyecto, fecha de siembra y el nombre del investigador principal y del asistente de investigación a cargo de las actividades. 9 g. La producción de semilla prebásica se hará mediante técnicas que hayan sido reportadas previamente en artículos, manuales o reportes técnicos: i. Producción convencional: Hidalgo et al. (1999). ii. Semihidroponía: Muro et al. (1999), Ranalli (1997), Ritter et al., 2001. iii. Hidroponía: Chuquillanqui et al. (2008). iv. Aeroponía: Andrade-Piedra et al. (2015). v. Nutrient film technique (NFT): Boersig y Wagner (1988); Naik y Karihaloo (2007); Chuquillanqui et al. (2008). Otras técnicas, como raíz flotante (KOPIA 2012), microtuberización por estrés hídrico (INIA s/a), etc. también podrán ser usadas, aunque en este caso se recomienda una fase previa de validación a las condiciones locales. a. El material de siembra será plántulas in vitro. En caso de necesitar mayor cantidad de material de siembra, se pueden usar técnicas de propagación rápida como el sistema autotrófico hidropónico (Rigato et al, 2001), o esquejes apicales, esquejes laterales, esquejes de tallo adulto, etc. (Hidalgo et al., 1999) provenientes de plantas madre obtenidas a su vez de plántulas in vitro. Se podrá usar brotes de tubérculos, siempre y cuando los tubérculos sean de categoría prebásica. b. En el caso de técnicas que usen sustrato, éste deberá tener características de porosidad (80-85%), baja densidad aparente (0,7 a 1), estructura granular o fibrilar estable, tamaño de gránulos intermedia, baja capacidad de intercambio catiónico, pH constante, adecuado nivel de nutrientes asimilables, fácil esterilización y fácil de mezclar. Se prohíbe el uso de sustratos provenientes de ecosistemas frágiles o de uso restringido según normas medioambientales locales. c. En el caso de sustratos en base a suelo, éste debe ser de tipo franco arenoso, previamente esterilizado al vapor o con fumigantes aprobados por la legislación local, preferentemente de baja toxicidad. d. En el caso de sustratos a base de arena o de otros materiales inertes, se recomienda que provengan de zonas alejadas de áreas mineras. De acuerdo con los requerimientos de trabajo, el sustrato puede ser lavado con hipoclorito de sodio (0,35% de cloro) con al menos 4 enjuagues con agua corriente, esterilizado al vapor o solarizado (CIP 2008). Se puede usar arena proveniente de la intemperización de las rocas, la cual es de fácil de uso, por el tamaño de los gránulos y porque proporciona buen drenaje al mezclarse con otros componentes del sustrato. e. La esterilización por vapor de cada componente del sustrato debe seguir las normas establecidas por la estación experimental. Debe tenerse en consideración las características fisicoquímicas de cada sustrato para evitar problemas de fitotoxicidad. f. La fertilización del cultivo se hará considerando el nivel de nutrientes de cada componente del sustrato y la técnica a usar. Los fertilizantes elegidos deberán estar aprobados por la legislación local. En el caso de producción convencional Hidalgo et al. (1999), al momento de la siembra se recomienda utilizar fertilizantes granulados y, durante el cultivo, fertilizantes líquidos. g. El trasplante de las plántulas in vitro o de otro material de siembra, como esquejes, debe realizarse cuando las plántulas enraizadas tienen un tamaño o número de foliolos adecuado para ser manipuladas. Utilizando pinzas de acero inoxidable, las plántulas serán extraídas del tubo de prueba o contenedor de plástico. Se retirará el medio de cultivo adherido a las raíces por inmersión en agua 10 destilada estéril o desionizada y luego colocarse en el sustrato o en discos de sustrato prensado previamente hidratados. h. En el caso de producción convencional, los riegos deben ser ligeros y frecuentes para evitar pudriciones radiculares. La humedad debe estar a capacidad de campo. Como medida preventiva puede aplicarse fungicidas al cuello de la planta o ser agregados al sistema de fertiirrigación. El aporque de las plantas debe realizarse en el momento adecuado de acuerdo con la variedad o genotipo en propagación. El objetivo es darle mayor anclaje a la planta, proteger a los tubérculos de la radiación solar y evitar el ataque de patógenos. i. El manejo de plagas y enfermedades se describe en la sección 4. j. Control de calidad en follaje. La primera inspección se realizará al 100% de las plantas, cuando estas tengan entre 10 y 15 cm de altura (antes de floración), de manera visual. En caso de encontrarse plantas con síntomas de virus (mosaicos, moteados, enrollamiento de hojas, etc.), atípicas, deformes, o con marchitez ocasionada por pudriciones o estrangulamientos del cuello, las plantas deben ser eliminadas inmediatamente, almacenándolas en bolsas plásticas y desechándolas en sitios autorizados por el supervisor de la estación experimental. Durante la primera evaluación visual se tomarán muestras al azar de cada genotipo, ya sea muestras de plantas individuales o muestras compuestas (entre 2 y 5 plantas por muestra). El número de muestras se determinará usando la metodología descrita por García (1999). La fórmula y resultado deberá mencionarse en el registro de inspecciones visuales y pruebas virológicas. Las muestras serán sometidas a pruebas de Ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), Hibridación de ácidos nucleicos (NASH), Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), o cualquier otra técnica recomendada por HQU, para cualquiera de los virus de la Tabla 1: Tabla 1. Viruses y viroide que pueden ser probados para producción de semilla prebásica. Patógeno Acrónimo Prueba Andean potato latent virus* APLV ELISA Andean potato mild mosaic virus* APMMV ELISA o PCR Andean potato mottle virus APMoV ELISA Alfalfa mosaic virus* AMV ELISA Potato black ringspot virus* PBRSV ELISA Potato yellow vein virus PYVV NASH o PCR Potato virus S* PVS ELISA Potato virus T* PVT NASH o PCR Potato yellowing virus* PYV ELISA Potato virus V PVV ELISA Potato virus X PVX ELISA Potato virus Y PVY ELISA Potato leafroll virus PLRV ELISA Potato virus A PVA ELISA Potato spindle tuber viroid* PSTVd NASH o PCR Tobacco mosaic virus* TMV ELISA *Virus transmitidos por semilla botánica. 11 Los virus para diagnosticar se seleccionarán de acuerdo con el destino de la semilla: • Si la semilla va a ser usada para producir semilla básica entonces se deben probar los virus PVY, PVX, PVS, PLRV y el viroide PSTVd. En caso de sospechar la presencia de otro virus mencionado en la Tabla 1, se realizará la prueba correspondiente. • Si la semilla se usará en ensayos que finalizan después de la cosecha (no se obtendrá semilla), las inspecciones solo serán visuales, con eliminación de plantas atípicas o síntomas de enfermedad. La tolerancia máxima para incidencia de virus en semilla prebásica es 0%. Si se usan muestran compuestas, y si las pruebas virológicas son positivas para cualquiera de los virus, se debe hacer una prueba individual de las plantas que conformaron la muestra compuesta. Si estas plantas resultan infectadas deben ser eliminadas. En caso los resultados indiquen la presencia de patógenos cuarentenarios (como PSTVd), se eliminarán todas las plantas. Luego de la primera inspección visual y de la toma de muestras, se harán evaluaciones visuales para enfermedades fungosas, virales y bacterianas de manera constante (una vez por semana). En cualquiera de estas evaluaciones, si se encuentran plantas con síntomas de marchitez bacteriana, éstas deben ser sometidas a pruebas de laboratorio (flujo bacteriano y aislamiento en medio de cultivo) y, en caso de confirmar la presencia de Ralstonia solanacerum, se descartarán todas las plantas del invernadero o casa malla. a. Antes de la cosecha y dependiendo de la técnica de multiplicación que se esté utilizando, se recomienda la aplicación de un desecante para eliminar la parte aérea de la planta y facilitar la cosecha. La aplicación debe realizarse por lo menos 15 días antes de la cosecha. b. La cosecha de los genotipos debe realizarse cuando las plantas han completado su madurez fisiológica. La cosecha será manual, luego de la cual se lavan los tubérculos con agua corriente, sobre todo en el caso de técnicas en las que el tubérculo está en contacto con una solución nutritiva (como en la aeroponía). c. Los tubérculos prebásicos serán clasificados en las siguientes categorías: Gruesa: Tubérculos mayores de 40 gramos. Primera: Tubérculos entre 30 y 39 gramos. Segunda: Tubérculos entre 20 y 29 gramos. Tercera: Tubérculos entre 10 y 19 gramos. Cuarta: Tubérculos entre 1 y 9 gramos. • Durante las labores de cosecha y clasificación se eliminarán tubérculos que sean deformes, que tengan daños físicos, o que tengan síntomas de enfermedades o de ataques de plagas. • Antes del almacenaje, los tubérculos prebásicos pueden ser tratados con fungicidas e insecticidas aprobados para su uso en papa. • Dependiendo del uso que se les quiera dar, los tubérculos pueden ser conservados en cámara fría a 4°C, a 90% de humedad relativa y sin luz; sometidos a un proceso para romper la dormancia (Marca e Hidalgo, 1999); o directamente almacenados en sitios con luz difusa con una temperatura entre 12 y 18°C y una humedad relativa de 60 a 70%, para que la brotación ocurra de manera natural. • El almacén de luz difusa debe ser largo y angosto, para el mejor aprovechamiento de la luz natural. Las paredes deben tener malla anti áfida, con cortinas de plástico transparentes que puedan ser enrolladas 12 en época de calor. El almacén debe tener en lo posible pisos lisos e impermeables. Se recomienda colocar trampas de luz, amarillas o bandejas de plástico con agua y detergente para evitar la infestación de insectos. La estructura y capacidad del almacén debe estar de acuerdo con la demanda de semillas, a normas de seguridad de la institución y a las consideraciones incluidas en las Buenas Prácticas Agrícolas. • Los tubérculos deben ser almacenados en jabas de madera o plástico, las que deben ser apilables, fáciles de limpiar y desinfestar. La profundidad de las jabas no debe ser superior al equivalente a 3 o 4 tubérculos sobrepuestos, pues impediría que la luz alcance a todos los tubérculos. Cada jaba debe tener la información del genotipo, fecha de cosecha, fecha de almacenamiento, categoría y tratamientos realizados a la semilla. Se recomienda el uso de código de barras. Pueden construirse camas con listones de madera a lo largo del almacén con una altura de 40 cm del suelo y separadas verticalmente unas de otras por al menos 30 cm. 6.2 Producción de tubérculos-semilla de calidad básica a. La producción de tubérculos-semilla de calidad básica se hará en campos dentro o fuera de CIP. El investigador principal del proyecto debe solicitar antes el campo de propagación dentro o fuera del CIP, en coordinación con el supervisor de la estación experimental, según el cronograma dispuesto por la estación experimental, y todos los materiales e insumos necesarios para producir tubérculos de papa. Los pedidos deben registrarse en el sistema web del CIP. b. El campo de cultivo no se debió cultivar con papa al menos 3 campañas agrícolas. c. Se sugiere seleccionar campos con buen drenaje, baja compactación, alta disponibilidad de nutrientes, de preferencia franco a franco arenosos, con pH entre 5.5 a 7.5. Debe realizarse análisis de suelo del terreno elegido para determinar las características físicas (estructura, textura) y químicas (pH, CIC) del suelo y luego seleccionar los fertilizantes o enmiendas adecuadas. d. La preparación del terreno debe realizarse en forma oportuna y con los implementos agrícolas pertinentes, para evitar la erosión del suelo. Las características del suelo preparado deben asegurar una adecuada germinación y posterior desarrollo de las plantas. e. La producción de semilla básica debe realizarse en terrenos ubicados en zonas aptas para producción de semilla definidas por la legislación local. De no existir esta legislación, se conseguirán lotes en zonas frías (para reducir la presencia de insectos vectores de virus) y con historial de baja o ninguna ocurrencia de enfermedades críticas para producción de semilla, como marchitez bacteriana (Ralstonia solanacearum), verruga de la papa (Synchitrium endobioticum) y PSTVd. Para el caso del Perú, se recomienda producir semilla básica en lotes ubicados sobre 3500 m.s.n.m. Los lotes de producción de semilla deben estar separados por los menos de 200 m de lotes comerciales de papa. f. La producción de tubérculos-semilla de calidad básica se hará a partir de tubérculos prebásicos, con brotes vigorosos y múltiples. De acuerdo con el objetivo de la siembra y a las características de cada variedad, se establecerán los distanciamientos entre plantas y entre surcos. g. Los tubérculos-semilla deben transportarse en jabas de plástico o madera, con su correspondiente identificación, para evitar daños en los brotes. 13 h. Los fertilizantes por usar deberán ser aprobados por la legislación local. Antes de la siembra se deben distribuir a chorro continuo en el fondo del surco y cubrir con una ligera capa de tierra para evitar quemar brotes. i. Los tubérculos-semilla se colocan en el fondo del surco teniendo cuidado de colocar los brotes hacia arriba. Deben taparse con una capa de tierra que corresponde a un tercio del tamaño del tubérculo semilla. j. Los riegos deben ser frecuentes procurándose que el suelo logre tener la humedad a capacidad de campo. k. El deshierbo debe ser realizado en forma manual o pueden usarse herbicidas selectivos aprobados para uso en papa. l. El aporque debe ser oportuno, preferentemente antes de la floración. El número de aporques dependerá de la variedad que se está propagando. m. El manejo de plagas y enfermedades se hará de acuerdo con lo descrito en la sección 5.4. n. Control de calidad en follaje. Se realizarán dos evaluaciones visuales: 1) cuando las plantas estén en estado de prefloración, y 2) después de la floración. o. Unos días antes de las inspecciones se deben realizar descartes de plantas con características no deseables (“roguing”), sean estas de carácter varietal o sanitaria. Las plantas descartadas deben ser colocadas en bolsas de plástico y desechadas en sitios autorizados por el superintendente de la estación experimental. p. Las tolerancias máximas permitidas de limitantes de calidad en campo serán las que indiquen la normativa local. Si no existe esta normativa, se usarán las tolerancias descritas en la Tabla 2. Tabla 2. Tolerancias máximas permitidas (%) en follaje para producción de tubérculos-semilla de calidad básica. Limitantes de calidad Inspección en campo 1ra. (prefloración) 2da. (posfloración) Mosaicos suaves y moteados (Ejemplo PVX) 1,0 1,0 Mosaicos severos y enrollamiento de hojas (Ejemplo PLRV y PVY) 0,5 0,0 Pierna negra (Pectobacterium spp.) 0,5 0,5 Nematodo Globodera spp. (plantas con quistes) 2,0 2 Nematodo Nacobbus aberrans 0,0 O,0 Marchitez fungosa (Ejemplo Verticillium y Fusarium) 2,0 1,0 Marchitez bacteriana, amarillamiento de venas 0,0 0,0 Mezcla varietal 0,0 0,0 Polilla Guatemalteca 0,0 0,0 Punta morada 0,0 0,0 14 El número de muestras que se evaluará se determinará usando la metodología descrita por García (1999). La fórmula y resultado deberá mencionarse en el registro de inspecciones visuales. a. Se recomienda la aplicación de un desecante para eliminar la parte aérea de la planta y facilitar la cosecha. La aplicación debe realizarse por lo menos 15 días antes de la cosecha. b. La cosecha de los genotipos debe realizarse cuando las plantas han completado su madurez fisiológica. La cosecha será manual o mecánica. c. Los tubérculos-semilla básicos serán clasificados en las siguientes categorías: Primera: Tubérculos entre 70 a 120 g Segunda: Tubérculos entre 40 a 69 g Tercera: Tubérculos menores de 39 g Al momento de la clasificación se deben descartar todos aquellos tubérculos enfermos, con deformaciones, daños por insectos, mezclas varietales, etc. d. Control de calidad en tubérculos. Una vez clasificados los tubérculos se debe tomar una muestra representativa de cada categoría, usando la metodología descrita por García (1999). Se realizarán inspecciones visuales sobre la incidencia (%) de enfermedades, plagas, enfermedades y otros problemas. Las tolerancias máximas permitidas (%) serán las de que indiquen la normativa local. En caso de no existir esta normativa se usarán las tolerancias descritas en la Tabla 3. Estas tolerancias podrán modificarse según las condiciones de cada país. Tabla 3. Tolerancias máximas permitidas (%) en tubérculos-semilla de calidad básica. Limitantes de calidad Tolerancia (%) Thecaphora solani 0 Ralstonia solanacearum 0 Synchitrium endobioticum 0 Papa manchada (“Zebra chip”) 0 Mezclas varietales 0 Rhizoctonia solani 2 Viroide (Potato spindle tuber viroid) 0 Spongospora subterránea 1 Fusarium solani 1 Pectobacterium spp. 1 Phytophthora infestans 1 Nematodos (Globodera, Meloidogyne) 1 Fuera de tamaño, rajados, inmaduros (“pelones”) o deformes 1 Daños por insectos y/o presencia de larvas (por ejemplo Premnotrypes spp., Phthorimaea operculella, Symmetrischema tangolias) 2 e. La identificación y almacenaje de tubérculos-semilla de calidad básica se hará siguiendo los procedimientos descritos para tubérculos-semilla de calidad prebásica. 15 6.3 Producción de tubérculos-semilla de materiales de mejoramiento y de conservación de germoplasma Para materiales provenientes de plantas in vitro, se seguirán las normas descritas en la sección 1, y para materiales provenientes de tubérculos-semilla o semilla botánica de calidad indeterminada, se seguirán las descritas en la sección 2, excepto el control de calidad, descrito a continuación. a. Para materiales de mejoramiento (Anexo 1): • Los parentales usados para los cruzamientos serán evaluados para PSTVd y PVT. • Entre las familias de tubérculos y la quinta. generación clonal se realizarán inspecciones visuales de síntomas de patógenos en invernadero y campo. • Antes de la introducción a condiciones in vitro, se realizarán pruebas para APLV, APMoV, AVB-O, PLRV, PSTVd, PVS, PVT, PVX, PVY y PYVV. b. Para materiales de conservación: i. Para variedades nativas (Anexo 2): Se realizarán inspecciones visuales de síntomas de patógenos durante la multiplicación y evaluación de materiales en invernadero y campo. ii. Para especies silvestres (Anexo 3): Plántulas provenientes de semilla botánica o usadas para producir semilla botánica serán probadas para PSTVd y PVT. También se realizarán inspecciones visuales de síntomas de patógenos en invernadero y campo. Se seguirán las indicaciones de Unidad de Cuarentena vegetal (HQU) en todos los casos en los que se requieran hacer pruebas virológicas. Plantas con síntomas de patógenos serán eliminadas, o sometidas a técnicas que permitan eliminar a los patógenos. En cualquiera de las inspecciones visuales, si se identifica un síntoma fuera de lo común, el oficial de cuarentena puede pedir que se haga una prueba de laboratorio específica. 6.4 Manejo integrado de plagas y enfermedades a. El investigador principal del proyecto debe establecer medidas preventivas dentro del enfoque de manejo integrado de plagas y enfermedades y sólo deberá usarse plaguicidas cuando no existan otras alternativas (ver Política operacional No. 2.1.7). b. Las prácticas de manejo integrado se adoptarán según la población de plagas y/o enfermedades en cada área geográfica y/o condición de crecimiento (invernadero o campo). c. La aplicación de plaguicidas se realizará previo monitoreo de las plagas o enfermedades. d. Los plaguicidas por usar deberán ser aprobados por la legislación local para el cultivo de papa. De preferencia se usarán plaguicidas de baja toxicidad e. Los plaguicidas deben ser usados para el control de las plagas o enfermedades que se indican en las etiquetas del producto y a las dosis recomendadas comercialmente. 16 f. La preparación, aplicación y eliminación de residuos de caldo de plaguicidas debe ser monitoreado por los supervisores inmediatos del aplicador, siguiendo la norma N° 2.1.7 (ver Política Operacional para aplicación de plaguicidas). g. El almacenaje de los plaguicidas debe ser de acuerdo con las normas establecidas por el CIP (Norma N° 2.1.7 Política Operacional para aplicación de plaguicidas). 6.5 Producción de tubérculos-semilla de calidad prebásica o básica bajo contrato a. Seleccionar a empresas o productores con antecedentes reconocidos de producción de semilla y que sean de acreditados por la autoridad competente (en caso de existir normativa para producción de semilla de papa). b. Verificar las técnicas de multiplicación, las medidas de higiene, el estado de la infraestructura, el historial de los campos, la capacidad administrativa, etc. mediante una visita a sus instalaciones y pidiendo referencias a otros clientes. c. Firmar un contrato especificando las características del material de siembra a usar y de la semilla que se recibirá: pureza genética, calidad sanitaria, edad fisiológica, estado físico, peso, cantidad, precio de venta, fecha de entrega, registros (ver sección 7.). d. Incluir una cláusula de penalidades en caso de incumplimiento del contrato. e. Si es la primera vez que se contrata a una empresa o a un productor de semilla, considerar planes de contingencia en la eventualidad que no se cumpla el contrato. Prever fondos adicionales para cubrir los costos de estos planes de contingencia o considerarlos en las penalidades del contrato. f. Las inspecciones y pruebas virológicas deben realizarse por técnicos de CIP e idealmente también por la entidad competente. Si se hace solo con técnicos de CIP, indicar en el contrato quién cubrirá los costos de movilización y análisis. g. Asegurar que la empresa disponga de material de siembra en la cantidad, calidad y fecha adecuada. De ser necesario, proveer de material inicial a la empresa (plantas in vitro o minitubérculos) y detallar su costo en el contrato. h. Elaborar e iniciar el contrato entre 12 y 18 meses antes de la fecha estimada de siembra. 7 Movimiento de semilla y otras regulaciones a. Está prohibido el movimiento y uso de tubérculos-semilla de origen indeterminado o sin la certificación sanitaria correspondiente de HQU o de la autoridad competente, así como aquellos producidos en campos de costa y selva, salvo en experimentos que tengan como fin la evaluación de la calidad de semilla producida en estas condiciones, u otros fines experimentales debidamente aprobados por la Dirección de Investigación. b. El material de siembra para uso en parcelas experimentales debe provenir de campos ubicados a más de 3500 m.s.n.m. y que cuente con la certificación sanitaria de la Unidad de Cuarentena Vegetal (HQU) o de la autoridad competente. c. El material de siembra para uso en invernaderos y casas de malla debe ser de categoría prebásica. En el caso de materiales de mejoramiento o de conservación de germoplasma, el material de siembra debe 17 tener la misma calidad sanitaria que la semilla prebásica o deberán realizarse los análisis sanitarios respectivos de acuerdo con lo requerido por el oficial de cuarentena del CIP. 7.1 Seguridad El personal debe usar los equipos de seguridad personal de acuerdo con las actividades a realizar y de acuerdo con los procedimientos operativos estándar (POE) disponibles en la Estación Experimental. El personal local contratado para realizar trabajos de multiplicación de semilla fuera de estación experimental debe cumplir las normas de seguridad y salud dispuestas por el CIP y la normativa nacional. 7.2 Registros Para tubérculos-semilla de calidad prebásica y básica producidos por CIP: a. Datos de identificación del material vegetal. b. Informe del estado sanitario del material de siembra, expedido por la Unidad de Cuarentena Vegetal (HQU) o por la autoridad competente. c. Plano de ubicación del campo e historial de uso (en el caso de semilla básica). d. Análisis de sustrato o suelo, e interpretación. e. Actividades agronómicas (preparación de sustrato o de suelo, fertilización, fecha de siembra, fecha de aporque, aporque, deshierbo, cosecha y almacenamiento). f. Aplicación de plaguicidas (nombre comercial, ingrediente activo, dosis, forma de aplicación, volumen). g. Datos del personal capacitado y certificado para realizar aplicaciones de plaguicidas. h. Resultados de inspecciones visuales y pruebas virológicas (incluyendo fórmula y resultados para tamaño de muestra). Para producción de semilla bajo contrato: a. Contrato para producción de semilla. En el contrato se debe indicar que la empresa o productor está obligada a llevar los registros descritos arriba. b. En caso de existir normativa para producción de semilla de papa: registro como productor de semilla de la empresa o productor por la autoridad competente del país. 18 8 Referencias CIP (2012). Política Operacional para aplicación de plaguicidas N° 2.1.7. Lima, Perú. CIP (2012). Política operacional sobre los procedimientos de conservación de recursos genéticos, adquisición y distribución de germoplasma. No. 2.1.2. Lima, Perú. Andrade-Piedra, J.L., Kromann, P. y Otazú, V. (Eds.). (2015). Manual para la producción de Semilla de Papa usando Aeroponía: Diez años de Experiencias en Colombia, Ecuador y Perú. Centro Internacional de la Papa (CIP), Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP), Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (CORPOICA). Quito, Ecuador. 267 p. Boersig, M.R., y Wagner, S.A. (1988). Hydroponic system for production of seed tubers. American Potato Journal 65:470-471. Centro Internacional de la Papa (CIP). (2008). Alternativas al uso del bromuro de metilo en la producción de semilla de papa de calidad. Documento de Trabajo 2007-2. Lima, Perú. 53 p. Chuquillanqui, C., Tenorio, J., y Salazar, L.F. (2008). Producción de semilla de papa por hidroponía. En: Alternativas al uso del bromuro de metilo en la producción de semilla de papa de calidad. Documento de trabajo 2007-2. Lima, Perú: Centro Internacional de la Papa (CIP). pp. 26-32. García, A. (1999). Tamaño de muestra para el control de calidad de tubérculos-semilla de papa. En: O. Hidalgo (Ed.). Producción de tubérculos-semillas de papa, Manual de capacitación. Lima, Perú: Centro Internacional de la Papa (CIP). Fascículo 5.4. Hidalgo O., Marca, J. y Palomino, L. (1999). Producción de semilla de prebásica y básica usando métodos de multiplicación acelerada. En: O. Hidalgo (Ed.). Producción de tubérculos-semillas de papa, Manual de capacitación. Lima, Perú: Centro Internacional de la Papa (CIP). Fascículo 4.3. Palomino, P. s/a. Microtuberización por stress hídrico, In INIA. Informe final del proyecto “Red de Innovación de Investigación y Desarrollo: hacia la diseminación eficiente y mecanismos de impacto pro -pobre con nuevas variedades de papa en la zona andina”. Lima, Perú. KOPIA. 2012. Producción de semilla de papa en Corea. Centro de Investigación para la Agricultura de Tierras Altas, RDA. Marca, J. e Hidalgo, O. (1999). Métodos para acelerar el brotamiento de los tubérculos-semilla. En: O. Hidalgo (Ed.). Producción de tubérculos-semillas de papa, Manual de capacitación. Lima, Perú: Centro Internacional de la Papa (CIP). Fascículo 2.4. Muro, J., Díaz, V., Goñi, J.L., y Lamsfus, C. (1997). Comparison of hydroponic culture and culture in a peat/sand mixture and the influence of nutrient solution and plant density on seed potato yields. Potato Research 40:431- 438. Naik, P., and Karihaloo J.L. (2007). Micropropagation for production of quality potato seed in Asia-Pacific. Asia- Pacific Consortium on Agricultural Biotechnology. Asia-Pacific Association of Agricultural Research Institutions, 2007. 46 p. Ranalli P. (1997). Innovative propagation methods in seed tuber multiplication programmes. Potato Research 40:439-447. 19 Rigato, S., Gonzales, A., y Huarte, M. 2001. Producción de plántulas de papa a partir de técnicas combinadas de micropropagación e hidroponía para la obtención de semilla pre-básica. Revista Latinoamericana de la Papa 12:110-120. Ritter, E., Angulo, B., Riga, P., Herran, C., Relloso, J., y San José, M. (2001). Comparison of hydroponic and aeroponics cultivation systems for the production of potato mini-tubers. Potato Research 44: 127-135. 20 9 Anexos Anexo 1. Flujograma de producción de semilla manejado por el programa de mejoramiento. 21 Anexo 2. Flujograma de conservación ex situ de papa nativa manejado por el Banco de Germoplasma 22 Anexo 3. Flujograma de conservación de papa silvestre manejado por el Banco de Germoplasma. PSTVd, PVT Visual Inspection 23